基因合成

基因合成

  • 工艺更稳定
  • 周期更短
  • 价格更实惠

服务特色

金开瑞自主研发的无引物基因合成以及非PCR基因合成技术,打破传统基因合成技术的局限,可合成您感兴趣的任意DNA序列,为您提供准确,快速,优质的全基因合成服务。

服务介绍

基因合成是指利用化学方法将一段完整的DNA序列合成成一条完整的DNA分子的过程,通常通过连接短的寡核苷酸序列逐步合成长链DNA。基因合成技术可以根据需求设计合成包括蛋白质编码序列、RNA干扰分子、基因表达调控元件等各种功能元件。这项技术在现代生命科学、医学研究、生物制药等领域都有着广泛的应用,可以为研究人员提供一种快速、高效的合成DNA分子的方法,为基因工程和基因组学研究提供了有力支持。

服务优势

  • 自主研发的超长识别序列核酸内切酶能精确切割双链DNA,且酶切位点可以根据要求定制,可用于基因大片段的组装,为合成生物学又添一件利刃。
  • 自主研发的超低反应温度多段重组酶,反应、转化均可在冰上进行,真正实现“One Step”。
  • 新技术工艺更稳定,周期更短,价格更实惠。

服务流程

订单接收
项目评估
基因合成
质 控
发 货

客户提供

基因序列或蛋白质氨基酸序列

最终交付

  • 约4 µg含有目的片段的高纯度冻干质粒DNA;
  • 含有重组质粒的穿刺菌或甘油菌一管(默认菌株为TOP10具体以样品管壁标签为准);
  • 发货文件主要包括如下内容:测序结果、COA报告、sqd文件、seq文件。

服务说明

服务内容 基因长度 周期
基因合成

0~1kb

7
1kb~2kb 8-13
2kb~3kb 12-17
3kb~4kb 16-20
4kb~5kb 20-25
5kb~6kb 25-30
大于6kb 咨询

案例展示

相关资源

1、基因合成实验中涉及到的一些专属名词及释义

    ● 寡核苷酸:由较少数量的核苷酸单元组成的短链,常用作DNA合成过程中的引物。

    ● 固相合成:一种常用的DNA合成方法,其中DNA链在固相材料(通常是小颗粒)上逐渐构建,通过逐步添加单个核苷酸单元来进行。

    ● PCR(聚合酶链式反应):一种常用的DNA复制技术,通过不断循环的变温步骤,在体外扩增和复制目标DNA序列。

    ● 载体:用于将合成的DNA序列转移到细胞中的DNA分子。常见的载体包括质粒、病毒或合成的DNA片段。

    ● 克隆:将DNA插入到载体中的过程,形成克隆DNA。克隆可用于扩增、保存和研究特定的DNA序列。


2、涉及基因合成的实验举例

实验类型

使用基因合成的应用

抗体定制

合成可变区域(variable region)或全长重链和轻链的基因序列,以构建定制的抗体。
双荧光素酶报告基因实验

构建包含双荧光素酶基因的报告基因载体,用于监测目标基因的表达水平和调控机制。

RNA干扰(RNAi)实验

合成小干扰RNA(siRNA)或小核苷酸发夹(shRNA),以抑制目标基因的表达。

CRISPR-Cas9基因编辑实验

合成CRISPR RNA(crRNA)和转录单元(tracrRNA),用于导向Cas9蛋白靶向基因组中的特定位点,实现基因编辑和修饰。

蛋白质标记实验

构建带有特定标签序列的蛋白质表达载体,用于蛋白质的纯化、定位和可视化,如融合标签(如His标签、GST标签)或荧光标签(如GFP标签)等。

克隆和表达实验

合成目标基因的DNA序列,并将其插入表达载体中,以实现目标基因的表达和产生特定蛋白质。

DNA纳米技术实验

利用基因合成构建DNA纳米结构和纳米器件,用于生物传感、药物传递、分子计算等应用。

基因组重编程实验

合成和设计基因组的改造,以研究基因组的功能、调控和重编程。

 

3、基因合成中用于设计、分析和操作合成的工具简介

工具

功能

ApE (A plasmid Editor)

用于DNA序列编辑和分析的免费软件,可以进行序列标记、限制酶切位点分析、引物设计等。

SnapGene

用于DNA序列设计、分析和模拟的商业软件,提供直观的界面和许多实用功能,如序列编辑、PCR模拟、蛋白质序列注释等。

Vector NTI

商业软件套件,用于DNA序列设计、分析和操作。它提供了多种工具,包括序列比对、引物设计、限制酶切位点分析等

Serial Cloner

免费的DNA序列编辑和分析软件,提供基本的序列操作和分析功能,如序列标记、PCR引物设计、限制酶切位点分析等。

Primer3

用于设计PCR引物的广泛使用的免费在线工具,根据给定的参数和目标序列自动设计引物。

OligoAnalyzer

用于评估DNA或RNA序列的理化特性和引物设计的免费在线工具。可以预测引物的熔解温度、GC含量、二级结构和互补性等参数。

BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)

用于序列比对和相似性搜索的免费在线工具,可以在数据库中搜索与给定序列相似的序列。

EMBOSS

(European Molecular Biology Open Software Suite)

提供一系列免费的生物信息学工具,用于DNA序列分析,如ORF预测、限制酶切位点分析、序列比对等。

UCSC Genome Browser

提供基因组序列和注释的在线浏览器,可以检索和分析各种物种的基因组信息。

Benchling

商业化实验室操作平台,用于设计、分析和操作DNA序列。提供了多种实用功能,如序列编辑、引物设计、限制酶切位点分析、克隆等。

 

4、基因合成失败及原因分析

①合成产物不存在/未扩增成功:

    ● 引物设计问题:引物序列选择不当,导致与目标序列不特异结合。

    ● 引物合成问题:引物质量不佳,包括错配、缺失或杂质。

    ● PCR条件问题:PCR反应条件不正确,如温度、时间和酶浓度等。

 

②扩增产物存在杂交/非特异性扩增:

    ● 引物设计问题:引物与其他非目标序列存在非特异性结合。

    ● 目标序列复杂性问题:目标序列具有高度变异性或复杂结构,导致引物无法特异性结合。

 

③扩增产物存在多个带或模糊带:

    ● 引物设计问题:引物选择不当,导致非特异性扩增或引物间的非特异性结合。

    ● 目标序列问题:目标序列存在拷贝数变异或基因组重复区域,导致扩增产物不明确或杂交特异性差。

 

④扩增产物偏低/低效:

    ● 引物设计问题:引物长度不合适或GC含量偏高或偏低,影响引物的特异性和扩增效率。

    ● PCR条件问题:PCR反应条件不适当,如温度、时间和酶浓度等。

    ● 目标序列问题:目标序列可能具有复杂结构或高度变异性,使扩增困难。

 

⑤引物降解或污染:

    ● 引物贮存问题:引物储存条件不当,如暴露在高温或湿度环境下,导致引物的降解和损坏。

    ● 污染问题:实验操作中引物、试剂或反应管的污染,影响扩增结果。

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