多克隆抗体定制
- 多种属
- 一站式
- 大规模
服务特色
金开瑞的多克隆抗体制备平台,以抗体平台为核心建立了一系列技术平台和动物养殖基地,可以提供包括兔、小鼠、大鼠、羊等多个系统的多克隆抗体制备服务,供您自由选择属于您的特殊需求!
服务介绍
多克隆抗体的制备是一种通过免疫宿主动物产生多个不同的抗体克隆的技术。它基于免疫系统的特性,通过免疫宿主动物对特定抗原的免疫刺激,诱导免疫细胞产生多样性的抗体,以应对抗原的多样性和复杂性。由于多克隆抗体具有可识别多个表位、可引起凝集反应、沉淀反应等优点,被广泛应用于免疫学诊断领域,经常用作WB实验中的酶标二抗和ELISA实验中的包被抗体。
多克隆抗体存在于免疫动物的血清中,可通过直接分离血清获得。由于具有可识别多个表位、可引起凝集反应、沉淀反应等优点,被广泛应用于免疫学诊断领域,经常用作WB实验中的酶标二抗和ELISA实验中的包被抗体。
服务优势
- 多样性:多个抗体克隆,覆盖多个抗原区域,提高抗原识别能力。
- 高特异性:精确识别目标抗原,减少非特异结合。
- 高亲和力:强烈结合目标抗原,增强抗原-抗体作用。
- 灵活性:适用于多种应用,满足不同研究需求。
- 容错性:部分抗体失效时仍有其他克隆起作用,减少失败风险。
- 成本效益:相对经济实惠,一次实验可获得多个抗体克隆。
服务流程
客户提供
重组蛋白:至少2-3 mg,蛋白纯度大于90%,浓度不低于0.5 mg/mL,蛋白分子量大于10kDa;
多肽:裸肽1 mg,偶联KLH/BSA/OVA或其他载体蛋白3-4 mg,裸肽纯度大于90%,序列长度不少于10个AA;
病毒/细菌/胶条/天然蛋白等抗原类型请具体咨询,另外也可选择由金开瑞制备抗原。
最终交付
- 免疫前抗血清1 mL;免疫后抗血清12 mL/只,亲和纯化的抗体10-15 mg
- 备注:若选择抗原亲和层析纯化,可提供1-5 mg纯化抗体;
- 鉴定报告,包括免疫原序列、SDS-PAGE电泳图谱、表达克隆测序报告、效价检测ELISA结果,并根据客户需求,提供抗体验证结果,如WB、IHC、IP、IF等。
服务说明
服务编号 | 客户提供 (抗原/信息) |
抗体纯化方式 | 抗体类型 | 服务内容 | 服务周期 |
JKR-pb001 | 抗原 | ProteinG/抗原亲和纯化 | 小鼠、大鼠、羊、等多抗 |
抗原质控,动物免疫,ELISA/WB检测, 采血,ProteinG/抗原亲和纯化,WB检测 |
8-10周 |
JKR-pb002 | 基因序列 (蛋白) |
ProteinG/抗原亲和纯化 | 小鼠、大鼠、羊、等多抗 |
抗原分析及设计,全基因合成,表达质粒构建, 蛋白表达及纯化,动物免疫,ELISA/WB检测, 采血,ProteinG/抗原亲和纯化,WB检测 |
20-24周 |
JKR-pb003 | 基因序列 (多肽) |
ProteinG/抗原亲和纯化 | 小鼠、大鼠、羊、等多抗 |
抗原分析及设计,多肽合成,载体偶联, 偶联物质控,动物免疫,ELISA/WB检测, 采血,ProteinG/抗原亲和纯化 |
16-20周 |
JKR-pb004 | 质粒模板 | ProteinG/抗原亲和纯化 | 小鼠、大鼠、羊、等多抗 |
蛋白表达及纯化,动物免疫,ELISA/WB检测, 采血,ProteinG/抗原亲和纯化,WB检测 |
16-20周 |
JKR-pb005 | 小分子化合物 | ProteinA/G亲和纯化 | 小鼠、大鼠、羊、等多抗 |
半抗原偶联载体,小分子偶联物质控,动物免疫, ELISA检测,采血,ProteinA/G亲和纯化 |
16-20周 |
JKR-pb006 | 磷酸化/甲基化/乙酰化等修饰信息 | 抗原亲和纯化 | 修饰抗体 |
多肽合成(修饰/非修饰多肽),载体偶联,动物免疫, ELISA/WB检测,采血,抗原亲和纯化(修饰非修饰多肽) |
24-28周 |
案例展示
常见问题与解析 (Q&A)
多抗制备整个流程大致包括:(1)抗原制备;(2)动物免疫;(3)血清采集与检测;(4)多抗纯化与保存。
分子量大于10kDa,B纯度>85%,浓度不低于0.5mg/ml,最好1–5mg/ml之间的可溶性蛋白。不应含有叠氮钠、咪唑、尿素或其它有毒有害刺激性大的物质。甘油含量应低于20%。质量大于6mg 必须:A SDS-PAGE检测图,清楚标示样品上样量,Marker上样量,和各自的浓度。 最好:C WB检测图
可以
(1)多肽是否偶联载体,偶联载体多肽:总量大于6-7mg,纯度大于80%;浓度大于0.5mg/ml;未偶联载体多肽总量大于10mg,纯度大于90%;浓度大于0.5mg/ml (2)必须提供如下信息:A SDS-PAGE检测图,清楚标示样品上样量,Marker上样量,和各自的浓度。
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一、多克隆抗体的制备流程及注意事项
1、抗原选择:选择适当的抗原作为免疫原。确保抗原具有较高的纯度和活性,并能够激发免疫响应。
2、免疫程序设计:确定免疫宿主动物、免疫时间表和剂量计划。根据抗原的免疫性质,确定免疫的次数和间隔时间。注意选择合适的免疫佐剂以增强免疫响应。
3、抗原免疫:将抗原与免疫佐剂混合后注射到免疫宿主动物体内,通常是通过皮下注射或腹腔注射。确保注射过程无菌,并根据动物的种类和重量调整注射剂量。
4、抗体检测和筛选:收集免疫宿主动物的血清样本,通过检测抗体的特异性和亲和力来筛选出高亲和力的抗体。注意选择合适的检测方法和控制实验条件,以确保筛选结果的准确性。
5、细胞融合和筛选:将免疫细胞与肿瘤细胞进行融合,生成杂交瘤细胞(hybridoma)。通过合适的筛选方法,如HAT选择培养基,筛选出产生目标抗体的杂交瘤细胞株。注意细胞融合和筛选过程的无菌操作,并确保细胞培养条件的稳定性和适当的培养时间。
6、抗体生产和纯化:将选定的杂交瘤细胞株进行扩增培养,产生大量的抗体。随后,通过抗体纯化技术,如蛋白A/G亲和层析、蛋白L层析或亲和层析柱等方法,从细胞培养上清中纯化抗体。注意选择适当的纯化方法以确保抗体的纯度和活性。
7、抗体验证:对制备的多克隆抗体进行验证和鉴定,确保其特异性和亲和力。验证的方法可以包括免疫组化、免疫印迹、流式细胞术等。注意使用适当的对照实验和标准品进行验证,并进行重复实验以验证结果的可靠性。
二、多克隆抗体的应用及重要性
应用 |
描述 |
重要性 |
免疫组化和免疫组织化学 |
检测和定位蛋白在组织或细胞中的表达和分布 | 观察和研究蛋白的定位、表达水平和功能 |
免疫印迹 |
检测和定量蛋白的存在、表达水平和修饰 | 研究蛋白的功能和相互作用 |
FC流式细胞术 |
细胞表面标记和细胞内蛋白的检测 | 细胞类型鉴定和免疫表型分析 |
免疫诊断 |
检测感染性疾病、肿瘤标志物和药物测定 | 临床诊断和疾病监测 |
药物研发 |
药物靶点发现和验证 | 治疗效果评估和新药研发 |
研究蛋白结构和功能 |
探索蛋白功能和相互作用 | 揭示蛋白的结构和生物学功能 |
免疫疗法 |
激活或抑制免疫系统的特定分子或细胞 | 癌症治疗和免疫调节 |