CO-IP
- 蛋白质复合物鉴定
- 蛋白质相互作用
- 信号传导研究
- 疾病机制解析
服务特色
Co-IP技术是研究蛋白质相互作用的重要方法之一，通过对蛋白质复合物的免疫沉淀和分析，可以揭示蛋白质相互作用的组成和功能，为理解生物过程和疾病机制提供重要的信息。
服务介绍
免疫共沉淀技术（co-Immunoprecipitation,co-IP）是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法，通过抗体和已知蛋白结合，从而捕获整个已知蛋白复合物，进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
服务优势
- 直接检测蛋白质与其他分子（如蛋白质、DNA或RNA）之间的相互作用，提供了定性和定量信息。
- 可以在原生条件下进行，更接近细胞内环境，有助于揭示生物体内的相互作用。
- 可以研究复杂的蛋白质复合物，包括多个亚基或较大的蛋白质复合物。
- 可以通过验证和功能研究进一步验证相互作用的生物学功能。
服务流程
客户提供
1、需检测的样品，一抗（也可以选择由金开瑞提供）。
2、送样要求：
▶ 离体后迅速超低温处理并-80℃冻存的组织样品，干冰运输；
▶ 组织：动物组织不少于400 mg；植物组织不少于2 g；
▶ 细胞：2x10^7个细胞。
服务说明
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
| 免疫共沉淀Co-IP | 蛋白提取 | 1 个样本 | 16 |
| Co-IP前wb | 跑胶1个泳道 | ||
| Co-IP | 富集2次：IgG、IP各1次 | ||
| Co-IP后诱饵蛋白wb | 跑胶3个泳道：IgG、IP、input | ||
| SDS-PAGE银染 | 跑胶3个泳道：IgG、IP、input | 4 | |
| 质谱鉴定互作蛋白 | 质谱鉴定：IgG、IP | 10-15 |
案例展示
常见问题与解析 (Q&A)
免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集，然后通过WB检测目的蛋白。 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CO-IP）是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀，可以检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用，也可以确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。
coIP实验需要保证足够的蛋白浓度才能维持原本存在的蛋白互作状态，尤其当蛋白丰度较低、相互作用力不强、使用不易提蛋白组织等情况时。而且coIP的实验条件往往需要反复摸索。因此用于coIP实验需准备细胞＞2x107，动物组织＞500mg，植物组织＞2g，并且须更加注意采集后速冻-80℃保存和避免反复冻融。
a.所使用的抗体不仅需要优秀的亲和力、特异性，其识别表位还可能被互作蛋白所掩蔽（主要是使用单抗时）； b.当蛋白互作须发生在特定生理代谢条件、组织细胞类型之中时，coIP实验可能无法获得互作结果； c.如果诱饵蛋白和或捕获蛋白在样本中丰度很低时； d.两个互作蛋白的亲和力较弱； e.当该蛋白互作需要较特定的离子强度，或者需要如Ca离子/Mg离子/ATP等辅因子时，要创造合适的反应条件会变得困难； f.一些样品处理提取存在难度，提取足量目的蛋白与保持蛋白天然状态，需通过实验条件达到优化平衡； g.外源表达的标签蛋白存在同内源蛋白的位点竞争，这主要在使用标签抗体进行实验时可能存在。
在coIP-WB鉴定结果中，IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带，说明IP过程成功；银染胶图中，IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异，说明coIP过程捕获到互作蛋白；IP产物在质谱检测中鉴定到的蛋白数量不能作为判断实验成败的标准，因为这取决于目的蛋白本身所具有的互作蛋白数量、结合力强弱等方面；IP产物的质谱鉴定数量越多并不代表结果越好。
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1、Co-IP的实验步骤
● 细胞提取：从细胞或组织中提取蛋白质，可以使用细胞裂解缓冲液来破裂细胞膜，并添加蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂来保护蛋白质的完整性。
● 抗体固定：将目标蛋白质的抗体与磁珠或琼脂糖小球等固相材料结合，形成抗体固定的材料。
● 免疫沉淀：将细胞提取物与抗体固定的材料一起孵育，使目标蛋白质与其结合伙伴形成复合物。
● 洗涤：将反应混合物进行多次洗涤，以去除非特异性结合的蛋白质和杂质。
● 洗脱：通过改变pH、离子强度或添加竞争剂等方式，将复合物从抗体固定材料上洗脱下来。
● 蛋白质分析：对洗脱的样品进行蛋白质分析，可以使用SDS-PAGE和免疫印迹等技术检测目标蛋白质及其结合伙伴的存在。
2、Co-IP的应用场景
● 揭示蛋白质复合物的组成和功能：Co-IP技术可以用于鉴定蛋白质复合物的组成和结构。通过选择特定的目标蛋白质作为抗体的靶点，可以将其与其他相互作用蛋白质共沉淀，从而确定蛋白质复合物的组成。这有助于理解蛋白质复合物在细胞内的功能、相互作用网络和信号传导通路。
● 研究信号传导和基因调控：Co-IP技术可用于研究蛋白质在信号传导和基因调控中的相互作用。例如，可以通过共沉淀实验来确定转录因子与DNA序列的结合，并揭示基因调控的机制。此外，Co-IP还可用于研究蛋白质激酶和底物之间的相互作用，从而了解细胞信号传导通路的调控机制。
● 鉴定疾病相关的蛋白质复合物：Co-IP技术可用于鉴定与疾病相关的蛋白质复合物。通过将目标蛋白质与疾病相关的样本共沉淀，可以发现与疾病发生和发展相关的蛋白质相互作用。这有助于理解疾病的发病机制、寻找潜在的治疗靶点，并为药物开发和治疗策略提供重要的线索。
● 蛋白质交互作用网络分析：通过大规模的Co-IP实验和蛋白质组学技术结合，可以构建蛋白质交互作用网络图谱。这些网络图谱提供了蛋白质相互作用网络的全貌，有助于了解细胞内蛋白质相互作用网络的结构和功能。这对于研究细胞过程、生物学调控和疾病机制等具有重要的意义。
3、与Co-IP技术相关的常见问题与解答
(1) Co-IP实验中如何选择合适的抗体？
▶ 选择具有高亲和力和特异性的抗体，最好是经过验证的商业抗体或有良好文献支持的自制抗体。
▶ 针对目标蛋白质选择不同的克隆，进行抗体特异性验证，如Western blotting。
▶ 进行预实验，评估抗体的适用性和效果。
(2) 如何优化Co-IP实验条件以提高效率和特异性？
▶ 优化提取和溶解条件，使用合适的缓冲液和洗涤液来提高蛋白质的溶解和纯化效率。
▶ 调整孵育时间和温度，以优化抗体与靶蛋白质的结合。
▶ 增加洗涤步骤，以去除非特异性结合的蛋白质。
▶ 使用阻断剂，如牛血清蛋白（BSA）或鱼精蛋白（Gelatin），减少非特异性结合。
(3) 如何解释Co-IP实验结果中的负面数据或低信号？
▶ 检查实验条件和步骤是否正确，如蛋白质提取、溶解、抗体结合等。
▶ 评估抗体的质量和特异性，进行抗体验证实验，如Western blotting。
▶ 重新评估目标蛋白质表达水平，确定其是否充分表达。
▶ 检查Co-IP实验条件是否适当，可能需要调整抗体浓度、孵育时间等。
