探针qpcr原理及实验步骤流程
探针 qPCR(定量聚合酶链反应)用于检测和定量DNA分子的方法,它结合了PCR技术和荧光探针技术。下面是探针 qPCR 实验的原理和步骤流程:
探针 qPCR实验原理:
PCR:PCR是体外扩增目标DNA序列的技术。它包括三个步骤:变性、退火和延伸。通过适当的引物,可以在每个循环中选择性地扩增目标序列。
探针技术:探针是一小段与目标序列互补的DNA片段,其上带有荧光染料和辅助的化学修饰物。当探针与目标序列结合时,荧光信号被释放出来。
qPCR:通过监测PCR反应过程中的荧光强度变化,可以定量测量目标DNA序列的数量。随着PCR循环次数的增加,荧光信号也相应增加,从而可以推断出初始模板数量。
探针 qPCR步骤流程:
1、提取和纯化DNA样品。
2、准备 qPCR 反应混合液,其中包括引物、探针、酶和缓冲液等。
3、向 qPCR 反应管中添加样品DNA和反应混合液。
4、将反应管放入 qPCR 仪器中,并设置适当的温度程序,包括变性、退火和延伸温度区间。
5、开始 qPCR 反应,通过循环加热和冷却来进行 PCR 扩增。
6、在每个循环的延伸步骤中,荧光信号会释放出来,并被 qPCR 仪器检测到。
7、在每个循环结束后,记录荧光信号的强度。
8、根据荧光信号的累积曲线,可以定量计算目标 DNA 的起始浓度。
探针 qPCR 结合了PCR技术和荧光探针技术,可以对目标 DNA 进行快速和准确的定量分析。通过监测PCR扩增过程中的荧光信号强度变化,可以确定目标 DNA 的起始浓度,并在生物学研究、临床诊断和遗传检测等领域中得到广泛应用。
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