rna pulldown如何分离蛋白和磁珠?

信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-09-06 14:19:00

    RNA pulldown用于富集与RNA相互作用的蛋白。在RNA pulldown中,磁珠通常被用作固相支持物,用于捕获与目标RNA结合的蛋白。要分离蛋白和磁珠,可以按照以下步骤进行操作:

    将磁珠与蛋白复合物从混合物中分离:将含有磁珠和与其结合的蛋白的混合物置于磁力架上,通过磁力吸附的方式将带有目标复合物的磁珠沉降至磁力架底部。此时,非特异性结合的蛋白和其他杂质会留在上层液相中。

    洗涤:使用缓冲溶液洗涤磁珠。洗涤缓冲溶液可以根据实验需求的不同而有所差异,常见的缓冲溶液包括PBS(磷酸盐缓冲液)或TBST(三丁基氧化铵洗涤液)。洗涤的目的是去除非特异性结合的蛋白和其他杂质。

    磁珠分离:将洗涤后的磁珠从磁力架上移除,可以使用磁力架旁边的吸头或者离心管架配件。将磁珠置于一个新的管中。

    与目标蛋白结合的RNA的释放:使用适当的方法,例如变性剂(如SDS)或去交联溶液,将与磁珠结合的蛋白从RNA上解离。这样,目标蛋白就会被释放到溶液中,而RNA则保留在磁珠上。

    分离蛋白和磁珠:采用旋转离心或磁力分离等方法,将磁珠沉淀到管底,上清液中含有释放的目标蛋白。可以小心地将上清液转移到一个新的管中,以分离蛋白和磁珠。

    具体的步骤可能因实验条件、磁珠类型和其他因素而有所不同。因此,在进行RNA pulldown实验时,最好参考相关文献或使用特定实验室已经验证的方法。




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