ChIP试剂盒（动物）

染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用,这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。利用抗体抗原特异性结合,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来，能够真实地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。

Q1:怎么探索超声条件

1)接触式超声仪:取2mLEP管,加入1.4mL液体,将探头置于EP管中心,液面下约一半的位置,设置 超声时间为10S,逐渐增加功率,直至开始起泡,此时功率为超声最大功率。在此基础上设置三个不同的功率梯度和时间梯度进行探索。

2)非接触式:可按厂家推荐进行探索。

Q2:超声后片段不符合要求

1)有符合要求的片段也有比较集中无法超声的大片段,可能是交联温度过高,交联时始终保持温度 低于25℃,尤其是夏天温度较高可将试剂和样本放置空调出风口一段时间再进行操作。

2) 片段很集中且小于200bp,超声功率和时间不合适,需要做预实验探索最佳超声条件。

Q3:IP和IgG样本Ct值没有差异

1)抗体没有富集到DNA,可更换抗体尝试。

2)IgG背景过高,可增加洗涤次数或减少免疫沉淀步骤DNA投入量。

3)结合位点预测错误,需重新设计引物。

Q4:溶解曲线异常

溶解曲线非单一峰,可能为非特异扩增或有引物二聚体等情况,需重新设计引物。

Q5:样本DNA浓度很低,低于10ng/μL

1)样本投入量过少:考虑增加样本初始投入量,尤其是肌肉,心脏等。

2)裂解不完全:样本过度交联或研磨不充分。

3)如遇难裂解样本可在加入LysisBuffer后-80°C急速冷冻,37℃解冻,反复冻融3次。

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