DNA pull-down试剂盒（植物）

DNA pull down 技术是体外研究DNA与蛋白质互作的有力工具。该技术针对目标区域设计特异性DNA探针并经过脱硫生物素标记,标记后探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合,再与总蛋白提取物进行孵育，有互作的蛋白质可以和DNA探针特异性结合,形成磁珠-DNA探针-蛋白复合物,洗涤去除非特异性结合的蛋白质,再经过洗脱得到目的DNA探针-蛋白质复合物,最后通过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质类型。其原理图如1.1:

Q:通过pull-down后银染验证发现，没有想要的目的条带?

1)有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持 4℃以下冰上操作并防止冻融；

2)有可能是加入生物素标记DNA量不足，可以增加生物素标记DNA量；

3)裂解液盐碱度太高，需用低盐碱度的裂解液；

4)加入细胞裂解液不够，可以增加细胞裂解量。

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