实验原理
萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(Renila luciferase)可分别催化荧光素(luciferin)或腔肠素(coelenterazine)氧化形成oxyluciferin或coelenteramide,并在此过程中产生生物荧光。Double-Luciferase Reporter Assay Kit首先以荧光素为底物检测萤火虫荧光素酶报告基因的活性,之后在淬灭该荧光反应的同时,以腔肠素为底物检测海肾荧光素酶报告基因的活性,具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广、无细胞内源活性干扰等特点。
常见问题与解答
Q:试剂盒在使用过程中有哪些注意事项?
A:Luciferase Reaction Buffer Ⅱ在溶解过程中可能有部分沉淀析出,使⽤前应充分需荡或将其置于37℃水浴锅中,保证其完全溶解后再使用。
Luciferase Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent Ⅱ反应前需平衡至室温。
为保证实验数据准确可靠,建议测量大量样品时使用排枪添加Luciferase Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent Ⅱ,使用过程中务必留意排枪各孔吸取的液体是否一致。
Luciferase Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent Ⅱ均易发生氧化反应,请合理安排实验,避免样品解冻后在室温下长时间放置。