“荧”在开学,金开瑞生物助力科研!
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2022-09-01 17:38:43
• 双荧光素酶检测是转录调控研究中十分重要的实验手段,主要应用于启动子和转录因子,以及miRNA和其靶基因互作的验证。
• 在双荧光素酶检测中,将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因,海肾荧光素酶作为对照报告基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达,而对照报告基因作为内对照。
• 以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性,荧光素酶可以催化荧光素,在荧光素氧化的过程中会发出生物荧光,然后通过化学发光仪测定。
microRNA靶基因包括mRNA、lncRNA、circRNA。对于microRNA表达量较高的细胞,可以同时构建microRNA的inhibitor进行验证。
双荧光素酶实验的其他应用:
• 启动子结构分析:将待测启动子区域序列进行分段截短,或对特定位点进行突变,再分别插入报告基因上游,检测其启动子的活性。
• 启动子SNP分析:一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性,将待测启动子插入报告基因上游,检测荧光素酶活性,从而判断这些启动子的相对活性。